林乃君老師協助微生物菌水檢測
2013.3.5
2013.9.19 增修
老實說，我是學理派的，總覺得要讓學理派上用場得再花一些時間。我很想幫妳們解決問題，可是現在有點力不從心的感覺。因為今年上半年對我來說很重要 (我要提升等，這是我唯一的一次機會)，得多花一點時間在準備上面。如果妳們願意的話，能否等我半年的時間，我真的很希望能幫妳們做一次全程菌相變化的調查，且針對能夠分解稻稈這件事做較多的探討，來找到你們在製備時比較可以成功的方法。我的能力跟時間有限，實驗室目前也沒有多餘的人手可以來幫我，倘若你們可以等我比較有空一點，我真的真的很願意幫忙。謝謝妳們讓我有這個機會參與台灣的農業，也讓我有機會把所學實用。~台大林乃君老師
2/3 台大辦泰國米之神研討會，鄭誠漢老師提議辦出不一樣的特色，想把大家做的微生物菌水做檢測，然老師們在升等與評鑑壓力下，有誰能幫忙呢？到台大繞幾個單位不太適合，回來查詢農業化學系網頁，看到幾位微生物與生物技術相關的老師，直覺林乃君老師的笑容最真誠可愛，打電話給她，實在太幸運，她很熱心答應幫忙，不僅1/2、1/28檢測兩批，2/3也到研討會上提出建議，學術界的老師願意解決小百姓問題，而且還是她忙著衝刺升等(台大有8年條款)的重要關頭，我真的很感激她與學生團隊的協助，衷心祝福她升等順利。
首先，我們從邱錦和老師拿到微生物菌水(2012/12/14中嶺池微生物水 250CC、12/16中嶺池微生物水200CC共450CC)，分在不同環境下複製
| 如貞 | 磯小屋 | 魏敏智 | 鄭誠漢老師 | |
| 糙米飯 | 無農藥無肥料栽種 | 賴青松有機糙米飯 | 賴青松有機糙米飯 | 沒有加 |
| 水 | 新莊生態池水 | 考種館過濾水 | 雨水+過濾過的自來水，然後煮開放隔夜再用 | 考種館過濾水 |
| 米糠 | 第7天加入宜蘭簡桂賢有機米糠 | 第8天加入宜蘭簡桂賢有機米糠 | 沒有加 | 貢寮水梯田有機米糠 |
| 地點 | 陽台 | 磯小屋志工休息室 | 溫暖房間 | 考種館作業室 |
| 攪拌次數 | 一天一次 | 一天一次 | 一天三次 | 一天一次(有時兩三天一次) |
| 容器 | 白色透光塑膠桶 | 藍色不透光塑膠桶 | 汽油桶 | 玻璃瓶 |
| 紀錄 | 微生物第一桶 | 微生物第二桶 | 微生物第四桶 | 微生物第三桶 |
2013/1/2 委託檢驗醱酵菌土及菌液報告
檢驗方法：稀釋平板法
菌土及菌液分別稀釋至10000倍後，取100mL 塗布於 plate count agar 及Potato dextrose agar 上，於室溫下培養四天，每天觀察並記錄。
檢驗結果：
1. 除了乾式醱酵基質中可以測得許多絲狀真菌之外，其他的樣品均以酵母菌及細菌為主，推測可能是因為液態培養的條件氧氣較為不足，故好氧的真菌較難生長
2. 乾式醱酵基質中每克所含的微生物菌數較液態醱酵菌液每 mL中所含的菌數為多。
3. 邱錦和老師的菌液，經不同人複製放大後，除了鄭誠漢老師的樣品之外，其餘的樣品中所分離到的菌種相似 (從酵母菌的菌落型態得知)。此外，鄭誠漢老師的樣品菌數也較其它樣品來得少。
4. 除了一、七和十號樣品之外，其餘的樣品於PCA 平板培養基上，在培養到第二至三天後，可以看到有許多及小的透明菌落，數目之多無法計數。
表一、各樣品中微生物之數量
|
檢體編號 |
檢體名稱 |
菌種 |
數目 |
製作日期 |
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1 |
乾式醱酵基質1 (蘭陽平原未破壞土地) |
真菌 (絲狀) |
3.35x107cfu/g |
2012/12/24 |
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酵母菌 |
1.64x107cfu/g |
|||
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細菌 |
4.47x107cfu/g |
|||
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2 |
雙連埤微生菌 |
真菌 (絲狀) |
2x105cfu/mL |
2012/10/25 |
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酵母菌 |
3.5x105cfu/mL |
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|
細菌 |
8.1x105cfu/mL+TNTC* |
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3 |
複製菌液 (邱錦和老師)2 |
真菌 (絲狀) |
1x105cfu/mL |
2012/12 (2013/1/1採樣) |
|
酵母菌 |
2x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
1.5x105cfu/mL+TNTC |
|||
|
4 |
複製菌液 (林如貞) |
真菌 (絲狀) |
none |
2012/12 (2013/1/1採樣) |
|
酵母菌 |
4.9x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
TNTC |
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|
5 |
複製菌液 (磯小屋) |
真菌 (絲狀) |
none |
2012/12 (2013/1/2採樣) |
|
酵母菌 |
7.9x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
TNTC |
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6 |
複製菌液 (鄭誠漢老師) |
真菌 (絲狀) |
none |
2012/12 (2013/1/2採樣) |
|
酵母菌 |
9.2x104cfu/mL |
|||
|
細菌 |
TNTC |
|||
|
7 |
鳳梨酵素 (林如貞) |
真菌 (絲狀) |
none |
2012/8 (2013/1/1採樣) |
|
酵母菌 |
3x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
2.5x104cfu/mL |
|||
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8 |
中嶺山菌土(原始土壤先經乾式，再經濕式醱酵。培養第三代) |
真菌 (絲狀) |
none |
|
|
酵母菌 |
1.3x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
1.8x106cfu/mL+TNTC |
|||
|
9 |
雙連埤菌土 |
真菌 (絲狀) |
none |
2012/11/25 |
|
酵母菌 |
2x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
7.8x105cfu/mL+TNTC |
|||
|
10 |
烘爐地菌土 (第三代) |
真菌 (絲狀) |
1.5x103cfu/mL |
2012/11/22 |
|
酵母菌 |
2x104cfu/mL |
|||
|
細菌 |
2x106cfu/mL |
1深溝進水場保護區原始土壤5kg，與糖蜜5kg、米糠 5kg、粗糠 5kg、竹葉五把及水5kg 混合後，放置於森林大樹底下
22013/1/1採樣，中間添加過兩次黑糖，顏色較深。
*第三天開始，在PCA plate 上會有許多很小、透明的菌落。由於多到無法計數 (稀釋倍數不夠多)，所以以TNTC (too numerous to count) 記錄之。
2013/1/28 委託檢驗醱酵菌土及菌液報告
目的：補做魏敏智及劉建甫先生的樣品，並以之前做過樣品作為對照，探討保存於 4°C 下對微生物相的影響。樣品於 2013.01.01或2013.01.02 採集完後，即放於冰箱中保存。
樣品觀察：魏敏智先生的樣品在香味及色澤上與邱錦和老師的相似。如貞的與磯小屋的相似。鄭先生的樣品在顏色上與劉建甫先生的相似，不過味道較酸。
檢驗方法：稀釋平板法
菌土及菌液分別稀釋至10000倍後，取100mL 塗布於 plate count agar 及Potato dextrose agar (含有 Rose Bengal 及 Streptomycin)上，於室溫下培養三天，每天觀察並記錄。
檢驗結果：
1.上次邱老師的樣品中尚有絲狀真菌，但這次所有樣品中均無該類微生物存在。所有樣品 (#1~#6) 均以酵母菌及細菌為主。菌數與上次檢驗結果差異不大，但明顯地，菌相種類變少。
2.邱錦和老師的菌液中，可以測到許多菌落如水滴狀的枯草桿菌(Bacillus sp.)。其它樣品中，僅台大的菌液中可測到該菌種，但數量相對來說少很多。
3.除了魏敏智先生的樣品之外，其餘的樣品於PCA 平板培養基上，在培養到第二至三天後，可以看到有許多及小的透明菌落，數目之多無法計數。
4.雖然都有酵母菌，但種類上也有差異。磯小屋的全部都是亮面的菌落，鄭誠漢先生的都是皺皺表面的菌落，其他人的則是兩種菌落都有。而 EM 菌中的則是平鋪型、不光滑的菌落。
5.EM 菌液中的菌數稍微偏少。
表一、各樣品中微生物之數量
|
檢體編號 |
檢體名稱 |
菌種 |
數目 |
製作日期 |
|
1 |
複製菌液 (邱錦和老師) |
真菌 (絲狀) |
None |
2012/12 (2013/1/1採樣) |
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酵母菌 |
1.9x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
1.45x106cfu/mL1+TNTC2 |
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|
2 |
複製菌液 (林如貞) |
真菌 (絲狀) |
None |
2012/12 (2013/1/1採樣) |
|
酵母菌 |
1.58x105cfu/mL |
|||
|
細菌 |
TNTC |
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|
3 |
複製菌液 (磯小屋) |
真菌 (絲狀) |
None |
2012/12 (2013/1/2採樣) |
|
酵母菌 |
1.88x106 cfu/mL |
|||
|
細菌 |
1.0 x104cfu/mL1 +TNTC |
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4 |
複製菌液 (鄭誠漢) |
真菌 (絲狀) |
None |
2012/12 (2013/1/2採樣) |
|
酵母菌 |
9.95 x105cfu/mL |
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|
細菌 |
TNTC |
|||
|
5 |
複製菌液 (魏敏智) |
真菌 (絲狀) |
None |
|
|
酵母菌 |
5.38 x106cfu/mL |
|||
|
細菌 |
3.89 x107cfu/mL |
|||
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6 |
複製菌液 (劉建甫) |
真菌 (絲狀) |
None |
|
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酵母菌 |
2.75 x106cfu/mL |
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細菌 |
TNTC |
|||
|
7 |
EM 菌 |
真菌 (絲狀) |
None |
|
|
酵母菌 |
1.1 x103cfu/mL |
|||
|
細菌 |
3.45 x106cfu/mL |
1 像水滴狀菌落 (為 Bacillus sp.)
2第三天開始，在PCA plate 上會有許多很小、透明的菌落。由於多到無法計數 (稀釋倍數不夠多)，所以以TNTC (too numerous to count) 記錄之。
林乃君老師說
1. 第一次做這樣的實驗，加上實驗室資源的關係，僅能進行好氧及兼性厭氧菌的檢驗，看起來，至少不同的人複製出來的菌液是差不多的，這是值得開心的事，因為這意味著如果將來邱老師用此菌液去處理水稻可以成功的話，妳們應該也有較大的機率可以成功 (只要繼續複製下去菌相不變就可以了)。
2.第二次檢驗出來的結果其實菌數雖然差不多，但菌相上卻有些許變化。這也造成你們六個人做出的菌水氣味上不太一樣。以後有機會再找出微生物菌較佳使用時機。
3.建議在培養微生物菌水時就把一小把稻稈切段，包起來掛在裏頭，一開始嘗試培養適合分解稻稈的微生物菌和觀測其分解能力，戴查老師不鼓勵將微生物菌單支分離，他認為是彼此效力，好壞不是由人來判斷，而是由植物的需求，這兒也看到林乃君老師寬容大度，能接受民間不同的論點。
這次邀請很多朋友一起做微生物菌，從原來小小的一瓶，複製分散到好多地方，讓我想起「生命在創造宇宙繼起之生命」，農業和生態都是如此。
2013.9.19 後記
我真是太高興了
收到農化系林乃君老師升等成功的好消息
因為年初2月磯小屋辦KKF研討會時
我詢問台大有哪位老師能幫忙作微生物檢測
大部分的人告訴我
"別想太多
台大老師忙著做國外期刊發表與評鑑升等
不太有人會做這種事"
而林乃君老師真的突破台大傳統迷思
而且今年還是她升等最重要的關卡年
能碰到林乃君老師
真的好像我自己和磯小屋中大獎
實在很感恩,很幸運
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